Kysymys:
muunnos, joka kutsuu ChIP-seq-tyylitietoja: samtools mpileup minimaalisilla suodattimilla
719016
2017-05-26 18:23:01 UTC
view on stackexchange narkive permalink

Käytän samtools mpileup -ohjelmaa (v1.4) bam-tiedostossa, jonka peittoaste on erittäin epätasainen (ChIP-seq-tyylitiedot). Haluan saada ensikierrosluettelon SNV: llä varustetuista paikoista ja niiden taajuudesta, kuten lukumäärät ilmoittavat, mutta riippumatta siitä mitä teen, saan kaikki SNV: t suodatetuksi siten, että ne eivät läpäise laadunvalvontaa.

Mitä maaginen parametri, joka on asetettu SNV: iden ja taajuuksien alkuperäiselle luettelolle?

MUOKKAA: tämä on kysymys, jonka lähetin "toinen" -sivustolle, mutta en saanut vastausta siihen.

Voisitko kokeilla toista soittajaa vain tarkistaa? Jotain [varscan] (http://dkoboldt.github.io/varscan/)?
@nuin Voin kokeilla sitä, salliko varscan sammuttaa suodatuksen?
Voisitko lisätä esimerkkejä kokeilemistasi komennoista?
@719016 Kokeile tätä [komento] (http://dkoboldt.github.io/varscan/using-varscan.html#v2.‌ 3_pileup2snp) ja muuta asetuksia, kuten _-- min-kattavuus _, _-- min-reads2_ ja _-- min-avg-qual_. Tämä auttaa myös tarkistamaan, liittyykö ongelmasi samtooliin vai BAM-tiedostoon
olen vain hieman huolissani siitä, että jos syvyys ei ole suuri ja myös ChIP-Seq-tiedoilla on ennakkoluuloja, se ei ole kovin luotettavia SNP: itä. HC SNP: n koko kohta on myös lukusyvyys, joka ei ole niin paljon perinteisessä ChIP-Seq: ssä
Kyllä, ehkä kutsuminen tulisi rajoittaa lähellä huippukokouksia, vertaa sitten näyte näihin tällaisten SNV: iden osajoukkoon
Kaksi vastused:
burger
2017-05-27 06:16:16 UTC
view on stackexchange narkive permalink

Käytin tätä aiemmin ChIP-seq-tietoihin ja se loi SNV: t:

  samtools mpileup \ - pakkaamaton --max-syvyys 10000 --min-MQ 20 --ignore -RG --skip-indels \ - fasta-ref ref.fa file.bam \ | bcftools call --consensus-caller \ > out.vcf  

Tämä oli samtools 1.3, jos sillä on merkitystä.

Sain sen toimimaan näiden parametrien kanssa. Kiitos!
user172818
2017-05-29 19:47:27 UTC
view on stackexchange narkive permalink

Toinen tapa on htsbox. Voit saada ehdokasluettelon:

  htsbox pileup -Cvcf ref.fa -q20 -Q20 -s5 file.bam > out.vcf  

Täältä , -q asettaa vähimmäiskartoituslaadun, -Q asettaa perustason vähimmäislaadun, -v tuottaa vain muunnoksia -c ulostulot VCF, -C antaa sinulle molempien säikeiden perustiedot ja lopuksi -s5 vaatii vähintään 5 korkealaatuista emästä alleelin kutsumiseksi. Se on hyödyllinen, kun tietosi eivät täytä oletettujen soittajaversioiden oletuksia.

Miksi et samtools + bcftools tai varscan? Läpinäkyvyys ja nopeus. Tämä komentorivi laskee yksinkertaisesti käyttämiesi parametrien perusteella. Se ei sovi lisätoimintoihin. Tämän vuoksi se on yli suuruusluokkaa nopeampi kuin samtools mpileup tai varscan. On syytä huomata, että samtoolit käyttävät oletusarvoisesti BAQ: ta, mikä vähentää FP: itä ajoittain. BAQ ei kuitenkaan ole aivan välttämätön pidemmille Illuminan lukemille ja se vahingoittaa herkkyyttä samanaikaisesti.

Aion ehdottomasti kokeilla htsboxia, kuten sanot, että se toimii yksinkertaisesti laskemalla parametrien perusteella.


Tämä Q & A käännettiin automaattisesti englanniksi.Alkuperäinen sisältö on saatavilla stackexchange-palvelussa, jota kiitämme cc by-sa 3.0-lisenssistä, jolla sitä jaetaan.
Loading...